دوہری طول موج کی ترتیب کے معاملے میں، مداخلت کرنے والے مادوں کی روشنی میں عام طور پر روشنی بکھرنے والی اور غیر مخصوص روشنی جذب ہوتی ہے، اس لیے اہم طول موج اور ذیلی طول موج کا تعین کرنا ضروری ہے، اور مرکزی طول موج کی خصوصیت جذب کی چوٹی ہے۔ مادہ جس کی جانچ کی جائے۔ ذیلی طول موج کی ترتیب کا اصول یہ ہے کہ مرکزی طول موج پر مداخلت کرنے والے مادوں کا جذب ذیلی طول موج کے جذب کے جتنا ممکن ہو قریب ہو۔ اسی جذب چوٹی، تو یہ ہیموگلوبن کی مداخلت کو ختم کر سکتے ہیں. لہذا، مداخلت کرنے والے کی بنیادی طول موج اور ثانوی طول موج جتنی قریب ہوگی، اتنا ہی بہتر ہے۔
پیمائش کی ضروریات
1. نمونہ: سیرم، پیشاب، دماغی اسپائنل سیال وغیرہ۔
2. ری ایجنٹس: سنگل ریجنٹ، ڈبل ریجنٹ
3. دوہری طول موج: دو طول موجیں جو مرکزی طول موج اور ذیلی طول موج پر مشتمل ہیں۔ پتہ لگانے کے عمل میں مداخلت کو ختم کیا جا سکتا ہے۔
4. کیلیبریٹر (معیاری): نامعلوم نمونوں کے ارتکاز کا موازنہ کریں۔
5. کوالٹی کنٹرول میٹریل: بائیو کیمیکل انسٹرومنٹ کے روزانہ کام میں آلات، ری ایجنٹس وغیرہ کی حالت کی نگرانی کے لیے استعمال کیا جاتا ہے۔
طریقہ
1. اختتامی نقطہ کا طریقہ (اختتامیہ) مکمل طور پر مصنوعات میں تبدیل ہو جاتا ہے، اور اختتامی نقطہ تک پہنچنے کے لیے ردعمل کو مزید انجام نہیں دیا جاتا ہے، اور جانچ شدہ مادہ کے ارتکاز کا حساب لگانے کے لیے ردعمل کے اختتامی نقطہ کے جذب کو لیا جاتا ہے۔ بائیو کیمیکل ٹیسٹوں میں، انزائمز، BUN، اور CRE کے علاوہ، پتہ لگانے کے لیے اختتامی نقطہ کے طریقے استعمال کیے جاتے ہیں۔
1)۔ ایک نقطہ اختتامی نقطہ کا طریقہ: نتیجہ کا حساب لگانے کے لیے جب رد عمل اختتامی نقطہ تک پہنچ جائے تو کسی نقطہ کی جاذبیت لیں۔
2)۔ دو نکاتی اختتامی نقطہ کا طریقہ: ردعمل شروع ہونے سے پہلے ایک نقطہ کی جاذبیت لیں، اور پھر جب رد عمل اختتامی نقطہ پر پہنچ جائے تو دوسرے نقطہ کی جاذبیت لیں۔ دوسرے پوائنٹ پر جاذب کو گھٹا کر پہلے پوائنٹ پر جاذب کو گھٹا کر نتیجہ کا حساب لگائیں۔ بنیادی طور پر ری ایجنٹس اور نمونہ خالی جگہوں کو گھٹانے کے لیے استعمال کیا جاتا ہے۔ نتائج کی درستگی کی ضمانت دیں۔ عام طور پر ڈبل ری ایجنٹس کے لیے استعمال کیا جاتا ہے۔
2. مقررہ وقت کا طریقہ (دو نکاتی طریقہ): یہ نتیجہ کا حساب کرنے کے لیے رد عمل میں موجود دو پوائنٹس کے درمیان فرق کو لینا ہے۔ یہ دونوں پوائنٹس نہ تو نقطہ آغاز ہیں اور نہ ہی رد عمل کا اختتامی نقطہ۔ بنیادی طور پر کچھ غیر مخصوص اشیاء کا پتہ لگانے کے لیے استعمال کیا جاتا ہے، جیسے کریٹینائن۔
3. مسلسل نگرانی کا طریقہ (متحرک طریقہ، شرح کا طریقہ): جب انزائم کی سرگرمی یا انزائم میٹابولائٹس کی پیمائش کرتے ہیں، تو جاذب قدر (△؛ A/min) جو رد عمل کے منحنی خطوط میں بدلتی ہے نتیجہ کا حساب لگانے کے لیے مسلسل لیا جاتا ہے۔ اسے صفر آرڈر ری ایکشن بھی کہا جاتا ہے کیونکہ لکیری رد عمل کے وقت پوائنٹس کے درمیان جذب کا فرق صفر ہوتا ہے۔